传染病检验
诊断实验室在收到送检病料时,应立即进行检验。羊传染病检验的一般程序和方法如下。
一、细菌学检验
(一)涂片镜检 将病料涂于清洁无油污的载玻片上,干燥后在酒精灯火焰上固定,选用单染色法(如美蓝染色法)、革兰氏染色法、抗酸染色法或其他特殊染色法染色镜检,根据所观察到的细菌形态特征,做出初步判断或确定进一步检验的步骤。
(二)分离培养 根据所怀疑传染病病原菌的特点,将病料接种于适宜的细菌培养基上,在一定温度(常为 37℃)下进行培养,获得纯培养菌后,再用特殊的培养基培养,进行细菌的形态、培养特征、生化特性、致病力和抗原特性鉴定。
(三)动物实验 用灭菌生理盐水将病料做成1比10悬液,或利用分离培养获得的细菌液,感染实验动物,如小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔等。感染方法可用皮下、肌肉、腹腔、静脉或脑内注射。感染后按常规隔离饲养管理,注意观察,有时还需对某种实验动物测量体温;如有死亡,应立即进行剖检及细菌学检查。
二、病毒学检验
(一)样品处理 检验病毒的样品,要先除去其中的组织 和可能污染的杂菌。其方法是以无菌手段取出病料组织,用磷酸缓冲液反复洗涤 3次,然后将组织剪碎、研细,加磷酸缓冲液制成1比10悬液(血液或渗出液可直接制成1比10悬液),以每分钟2000~3000转的速度离心沉淀 15分钟,取出上清液,每毫升加入青霉素和链霉素各 1000单位,置冰箱中备用。
(二)分离培养病毒不能在无生命的细菌培养基上生长,因此要把样品接种到鸡胚或细胞培养物上进行培养。对分离到的病毒,用电子显微镜检查、血清学试验及动物实验等方法进行理化学和生物学特性的鉴定。
(三)动物实验 将上述方法处理过的待检样品,或经分离培养得到的病毒液,接种易感动物。其方法与细菌学检验中所用者相同。
三、免疫学检验
在羊传染病检验中,经常使用免疫学检验法。常用的方法有凝集反应、沉淀反应、补体结合反应、中和试验等血清学检验方法,以及用于某些传染病生前诊断的变态反应等。近年又研究出许多新的方法,如免疫扩散、荧光抗体技术、酶标记技术、单克隆抗体技术等。