2.计数法 用血球计数板进行。先用红血球稀释管吸取原精液至0.5刻度处,用纱布擦去吸管头上沾附的精液,再吸取3%~5%的氯化钠溶液到刻度 101处,以拇指及中指按住吸管两端充分摇动,使氯化钠溶液与精液充分混匀,这样把精液稀释到 200倍。吹掉管内最初几滴液体,然后将吸管尖放在计算板中部的边缘处,轻轻滴入一小滴,让其自然流人计算室内,这时即可在 600倍显微镜下计算精子。计数5个大方格精子总数乘以1千万,即为1毫升精液的精子数。
3.光电比色法 先将经过精确计算精子数的原精液样本0. 1毫升加人 5毫升蒸馏水中,混匀,在光电比色计中测定透光度,读数记录,做出精子密度表,以后测定精子密度时,只要按上法测定透光度,然后查表就可知道每毫升精子数。
在生产中常用的是第一种方法,比较容易操作。通常精子密度在“中”以下就不能用于输精。
(五)精子形态 精液中变态精子过多,会降低受胎率。
凡是精子形态不正常的均为畸形精子,如头部过大、过小,双头,双尾、断裂、尾部弯曲,带原生质滴等。
三、精液的稀释
稀释精液的目的在于扩大精液量,提高优良种公羊的配种效率,促进精子活力,延长精子存活时间,使精子在保存过程中免受各种物理、化学、生物因素的影响。
人工授精所选用的稀释液要力求配制简单,费用低廉,具有延长精子寿命、扩大精液量的效果。最常见的稀释液有以下几种:
(一)生理盐水稀释液 用注射用0.9%生理盐水作稀释液,或用经过灭菌消毒的0.9%氯化钠溶液。此种稀释液简单易行,稀释后马上输精,也是一种比较有效的方法。此种稀释液的稀释倍数不宜超过两倍。
(二)葡萄糖卵黄稀释液于100毫升蒸馏水中加葡萄糖3克,柠檬酸钠1.4克,溶解后过滤灭菌,冷却至 30℃,加新鲜卵黄20毫升,充分混合。
(三)牛奶(或羊奶)稀释液 用新鲜牛奶(或羊奶)以脱脂纱布过滤,蒸气灭菌 15分钟,冷却至 30℃,吸取中间奶液即可作稀释液用。
上述稀释液中,每毫升稀释液应加人500国际单位青霉素和链霉素,调整溶液的氢离子浓度为 100纳摩/升(pH 7)后使用。稀释应在25~30℃温度下进行,对稀释后的精液经过检查方可输精。
四、精液保存
为扩大优秀种公羊的利用效率、利用时间、利用范围,需要有效地保存精液,延长精子的存活时间。为此必须降低精子的代谢,减少能量消耗。可采用降低温度、隔绝空气和稀释等措施,抑制精子的运动和呼吸,降低能量消耗。
(一)常沮保存 精液稀释后,保存在 20℃以下的室温环境中,在这种条件下,只能保存1~2天。
(二)低温保存 在常温保存的基础上,进一步缓慢降低至 0~5℃之间。在这个温度下,保存的有效时间为2~3天。
(三)冷冻保存 家畜精液的冷冻保存,是人工授精技术的一项重大革新,它可长期保存精液。牛、马精液冷冻已取得了令人满意的效果。羊的精子不耐冷冻,受胎率较低。