鸽病免疫学检查(三)

第四步,判断和记录结果,依据如下:

  “一”表示红细胞不凝集。高浓度的新城疫病毒抗血清能抑制新城疫病毒对鸡红细胞的凝集作用,使反应孔中的红细胞呈圆点状沉淀于反应孔底端中央,而不出现血凝现象。

  “+”表示红细胞完全凝集。随着血清被稀释,它对病毒血凝作川的抑制减弱,反应孔中的病毒逐渐表现出血凝作用,而最终使红细胞完全凝集,沉于反应孔底层,边缘不整或呈锯齿状。

表1-2 病毒血凝抑制试验操作术式

孔 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

磷酸缓冲盐水

505050505050505050505050(微升)

抗血清(微升)

505050 5050505050505050—(待检血清)

血清稀释倍数 2¹ 22 2³ 2⁴ 25 26 27 28 29 2¹⁰病毒生理

血凝 盐水

对照对照

4个血凝单位 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 一

病毒抗原(微升)

室温(18℃~20℃)作用20分钟,或置37℃恒温培养箱中作用15~20分钟

0.5%鸡红 细胞液 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50

振荡1分钟室温静置30~40分钟,或置37℃恒温培养箱中20~30分钟后观察结果

结果举例 — — — — — — ± ± + + + —

“士”表示可疑。红细胞下沉情况介于“一”与“+”之间。

能完全抑制红细胞凝集的血清最大稀释倍数叫该血清的血凝抑制滴度。利用病毒的血凝抑制试验,不仅可以通过已知抗体确定未知病毒,而且还能利用4个血凝单位的已知病毒和一定浓度的红细胞检查待查血清中抗体的血凝抑制滴度及其变化,从而用于免疫接种效果的检查及传染病的免疫监测。

一般认为,如果鸽群的平均血凝抑制滴度在2}左右,则肉鸽免疫水平较高,新城疫流行的可能性极小。

(二)凝集试验 凝集试验所用的诊断液一般为颗粒性抗原,可以检查鸽相应的抗体,在肉鸽上可以用来诊断鸽沙门氏菌病、鸽支原体病等;也可以用已知抗体检查细菌等病原。以平板凝集试验为例,其方法和步骤如下:

第一步,取一长方形洁净玻璃板,用玻璃铅笔画成若干方格,编号。

  第二步,用25微升移液器分别吸25微升被检血清、生理盐水、标准阳性血清、标准阴性血清加于不同编号的方格内,每吸一个样本需更换吸头。然后吸取抗原25微升,滴加于玻板的每一个格内,用牙签将抗原与血清充分混合均匀,每混合一个检样需更换一根牙签。于室温(15℃以上)静置4分钟观察结果,如室温过低,可适当加温。

  第三步,结果判定。在对照标准阳性血清出现凝集(十)、标准阴性血清不出现凝集(一)、生理盐水不出现凝集(一)的情况下,被检血清出现凝集片或小颗粒状凝集,液体透明,则判定为阳性(+);若液体均匀浑浊,无任何凝集颗粒,则判定为阴性(一)。

  本法操作简便,容易掌握和判断,适用于鸽沙门氏菌病等的诊断。

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