表1-1 病毒血凝试验操作术式(以新城疫病毒为例)
孔号 l 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
磷酸缓冲盐水 （微升） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃
新城疫病毒液 （微升） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
病毒稀释倍数 2¹2²2³2⁴2⁵2⁶2⁷2⁸2³2¹⁰2¹¹对照
0.5%红细胞 悬液（微升） 50505050505050505050 50
振荡1分钟，或手持血凝板摇动混匀，室温(18℃~20℃)下作用30~40分钟，或置于37℃恒温培养箱作用15~30分钟后观察结果
结果举例 + + + + + + ± ± ± 一 — —
30分钟后取出，观察并判定结果。
第四步，判定及记录结果。
“+”表示红细胞完全凝集。红细胞凝集后完全沉于反应孔底层，呈颗粒状，边缘不整或呈锯齿状，而上层液体中无悬浮的红细胞。
“一”表示细胞未凝集。反应孔底部的红细胞没有凝集成一层，而是全部沉淀成小圆点，位于小孔最底端，边缘水平。
“士”表示可疑。红细胞下沉情况介于“+”与“一”之间。
在该反应中，病毒液随着稀释倍数的增加，其凝集红细胞的作用逐渐变弱。稀释到一定倍数时，就不能使红细胞出现明显的凝集，从而出现可疑或阴性结果。能使全部红细胞发生凝集(十)的反应孔中病毒液的最大稀释倍数为该病毒的血凝滴度，或称血凝价。
2.病毒血凝抑制试验 采用同样的血凝板，每排孔可检查1份血清样品。检查另一份血清时，必须更换加样器吸头。操作步骤如下。
第一步，制取4个血凝单位的病毒抗原。用磷酸缓冲盐水稀释病毒抗原，使之含4个血凝单位的病毒。稀释倍数计算公式为：病毒抗原应稀释倍数=病毒的血凝滴度÷4
如表1—1中病毒液的凝集价为26(6号孔)，则将原病毒液稀释2个4倍，即为4个血凝单位的病毒抗原。
第二步，制备待检血清。从鸽翼静脉或心脏采血0.8~1.0毫升，不加抗凝剂，让血液在室温下自然凝固60分钟，或在370C温箱中凝固30分钟，转人0℃~4℃冰箱中过夜，取出后吸取血清，即可用于检查抗体。
第三步，按表1-2操作。用微量加样器向1~12号孔中分别加入50微升磷酸缓冲盐水。更换加样器吸头，吸取一份新城疫病毒抗血清(或待检病鸽的血清)50微升置于第一孔中，吹吸3次混匀。然后依次倍比稀释至第十孔后，从第十孔中弃去50微升。第十一孔为病毒血凝对照，第十二孔为生理盐水对照。
更换加样器吸头，吸取稀释好的4个血凝单位的病毒抗原，分别向1~11孔中各加50微升。然后，将反应板置室温下作用20分钟，或在37℃恒温培养箱中作用15~20分钟。取出反应板，用微量加样器向每孔中各加入50微升。.5%红细胞悬液，再将反应板置于微型振荡器上振荡1分钟，混合均匀。将反应板置于37℃恒温培养箱中作用20~30分钟后取出，观察并记录结果。