病原学检查
对鸽传染病和寄生虫病进行病原学检查是确诊疫病的依据,同时也是制定正确防治措施的根据。由于细菌、病毒、寄生虫的生活特性不同,病原学检查的方法也各异。
(一)细菌学检查 通常在显微镜下检查细菌的染色形态,分离培养细菌,观察其培养特点,以及对分离的细菌进行生化试验,从而鉴定细菌。
1.细菌形态检查 将病料涂片、触片自然干燥或用甲醇固定后,做染色镜检观察形态。常用的细菌染色方法有革蓝氏染色法、碱性美蓝染色法、抗酸染色法、姬姆萨氏染色法等,真菌病料可制成压片、螺旋体病料可制成悬滴标本直接镜检,可分别见到菌丝、抱子和运动的螺旋体。
2.细菌分离培养 多数病原菌可在普通琼脂培养基、血液(血清)琼脂培养基和厌气肉肝琼脂培养基上生长并呈现菌落特征;真菌可在沙氏琼脂上生长,支原体可在加有血清(马、猪)的合成琼脂上生长。通常先作划线、培养,然后挑选单个典型菌落进行分离培养与鉴定。
3.病原菌鉴定 通常可根据病原细菌的形态特征、培养特性、生化特点和定型血清交叉试验等进行,同时也可通过本动物致病性试验鉴定其病原性。
(二)病毒学检查
1.病料处理 取保存的病料置于5~10倍体积的灭菌生理盐水(Hanks液、磷酸盐缓冲液)中洗去保存残液,然后置于5~10倍病料体积含双抗(青霉素、链霉素各500毫克/毫升)的生理盐水中制成匀浆悬液,低速离心后上清液即为病毒分离材料,置于一30℃保存备用。
2.病毒分离培养(1)鸡胚培养 多数病毒特别是禽病毒,可通过绒毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔、卵黄囊等不同途径,接种不同日龄鸡胚而生长繁殖,多数病毒还能形成胚胎病变,如致死、水肿、出血、病斑等,然后收取胚液、胚体,即为含毒物,置于-30℃保存备用。
(2)细胞培养 病毒细胞培养应具备细胞系统(原代、传代细胞)、营养系统(培养液)和生长环境系统(器材、药品、温度、pH 值、无菌)三方面的条件,否则不能在体外生长繁殖。病毒在细胞上生长增殖后会产生细胞病变(圆缩、拉网、合胞体、脱落),收取后置于一30℃备用、鉴定。
3.病毒鉴定 通常根据病毒的培养特性(鸡胚病变、细胞病变)、电镜检查、特性检查(理化特性、生物学特性)和免疫血清学检查做出鉴定,同时也可回归本动物作病原性鉴定。
(三)寄生虫学检查
1.虫体检查 可将剖检时采集的体内、体外虫体标本(蛔虫、绦虫、线虫和蝉、蜡、虱等)在放大镜、显微镜下进行检查鉴定;有些小体虫如吸虫、球虫也可利用粪便检查鉴定。
2.蠕虫病虫体检查 简单常用的检查方法有两种。一是直接涂片法,即在载玻片上滴少许5%甘油生理盐水,加上少许新鲜粪便混匀成粪液,盖上盖玻片后镜检,此法检出率不高;另一种是集卵法。利用虫卵在清水中下沉和在饱和盐水中上浮的特性收集后镜检,可提高检出率。其一是沉淀法,即取粪便3~5克加清水稀释搅匀成粪水,用铜筛网过滤除去粪渣,滤液静置30分钟,弃去上清液,沉淀渣用水反复洗数次直到上清液透明,取沉淀镜检,本法适用于检查吸虫卵。其二是漂浮法,即取粪便5克,加入饱和食盐水50毫升,搅匀后用铜筛网过滤除去粪渣,滤液静置30分钟,虫卵上浮后用白金耳勾取表层液膜置于载玻片上镜检。本法适用于线虫卵、球虫卵囊检查。
3.原虫病检查 寄生于鸽的原虫有血液原虫、消化道原虫和组织原虫等。
(1)血液原虫检查 法采取血液涂片,干后用无水中性甲醇固定,用姬姆萨液染色后镜检。
(2)消化道原虫检查法 取少许新鲜带血粪便,置于滴有一滴生理盆水的载玻片卜,混匀涂片,盖上盖玻片镜检,本法适用于检查毛滴虫、球虫等。
(3)组织原虫检查法 取组织病料作抹片、触片或制成组织切片,前者经姬姆萨氏染色或瑞氏染色后镜检,后者可用苏木精一伊红染色后镜检。